凝膠遷移或電泳遷移率實驗(electrophoretic mobility shift assay,EMSA)是一種研究DNA/RNA結合蛋白和其相關的DNA/RNA結合序列相互作用的技術,可用于定性和定量分析。依據實驗需要,設計標記探針、非標記探針、蛋白特異性抗體等參照物,基于DNA-蛋白質或RNA-蛋白質復合體在聚丙烯酰胺凝膠電泳(PAGE)中有不同遷移率的原理,當轉錄因子與特異的DNA或RNA結合后,其在PAGE中的遷移率將小于未結合核蛋白轉錄因子的DNA,從而檢測到活化的與DNA或RNA結合的蛋白轉錄或調節因子。
安必奇生物提供的EMSA實驗,基于生物素標記探針與對應的DNA結合蛋白的特異性結合,設計合理、科學的實驗方案,為客戶提供驗證性的EMSA,競爭性的EMSA以及超遷移EMSA(Super-shift EMSA)實驗服務。
EMSA凝膠阻滯遷移電泳檢測原理圖
服務內容
| 服務內容 | 項目說明 |
| 驗證性EMSA | 驗證生物素標記探針與結合蛋白互作的EMSA |
| 競爭性EMSA | 生物素標記探針、非標記探針與結合蛋白互作的EMSA |
| 超遷移EMSA | 特異性抗體進一步鑒定探針與蛋白結合物的EMSA |
技術流程
| 技術流程 | 說明 | 周期 |
| 探針設計合成 | 客戶提供結合基因序列或參考文獻來分析設計合成 | 1-2周 |
| 標準蛋白樣品制備與定量 | 蛋白標準樣品的制備與濃度測定,蛋白樣品制備要現配現用 | 1周 |
| EMSA 凝膠電泳遷移檢測 | 泳道設定及濃度梯度實驗設計 | 1周 |
| 結合蛋白的純化與質譜檢測(未知蛋白需要檢測) | 蛋白純化,質譜檢測進行肽段檢索與聚類分析 | 1-2周 |
客戶需準備的材料
? 細胞(>2*107)或細胞核蛋白或純化的轉錄因子,部分實驗亦可使用重組表達的蛋白;
? 目的蛋白一抗及相關試劑盒;
? 探針序列或預測核酸作用基因序列;
? 陽性對照樣品。
實驗報告內容
? 探針設計合成信息;
? 原始數據、結果圖片;
? 完整的實驗報告(含實驗步驟、流程)。
核酸與蛋白互作研究訂單表
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