SILAC即細胞培養(yǎng)條件下穩(wěn)定同位素標記技術(Stable Isotope Labeling By Amino Acids In Cell Culture,SILAC)，其實驗原理是在細胞培養(yǎng)基中加入輕、中或重型穩(wěn)定同位素標記的必需氨基酸(賴氨酸和精氨酸)，通過細胞的正常代謝，使新合成的蛋白帶上穩(wěn)定同位素標簽。等量混合各類型蛋白質,酶解后進行質譜分析。通過比較一級質譜圖中同位素峰型的面積大小進行相對定量，同時二級譜圖對肽段進行序列測定從而進行蛋白鑒定。

技術優(yōu)點

• 活細胞水平標記技術，標記效果穩(wěn)定，其標記效率不受裂解液的影響。標記效率較高。

• 樣本需求量少，通常每個樣品需要幾十微克的蛋白量。

• 采用質譜定量，可同時鑒定并定量多種蛋白質。

• 多個樣品混合后同時進行分離、酶切和鑒定，后續(xù)實驗對樣品的影響是一致的，減少了實驗操作和儀器設備產生的影響，具有精密度和重現(xiàn)性。

• 標記采用的是體內標記技術，接近樣品真實狀態(tài)。

技術平臺

Triple TOF 5600, Q-Exactive, Orbitrap Fusion? Tribrid?

應用領域：

• 機理和調控機制研究

• 動態(tài)過程中機制研究

• 疾病標志物的篩選

• 用藥及預后標志物篩選