外源質粒DNA整合到宿主細胞染色體上,使宿主細胞可長期表達目的蛋白,稱穩定細胞系。穩定細胞系在生物學研究中扮演著非常重要的角色,包括基因功能研究、重組抗體、藥物開發等。然而構建一個有效的細胞系是一件復雜而費時的工作。安必奇作為專業的生物醫藥研發服務機構,擁有一系列穩定細胞系構建前沿技術及豐富的哺乳動物細胞培養經驗,可以為您提供各種細胞系定制服務。我們已經為世界各地的客戶構建了各種各樣的定制細胞系,包括基因過表達(Reporter細胞系、GPCR細胞系、離子通道細胞系等)、Knockdown、Knockout細胞系等。我們深知科研工作的時間寶貴,因此致力于細胞系定制服務。我們構建的細胞系可直接應用于各種下游的生物學研究,包括基因調控、蛋白質工程、重組抗體制備、藥物研發等。
同時,我們提供醫學疾病分子機制整體課題外包服務,基于細胞/動物模型,發現新致病基因和已知致病基因的突變型,從而研究疾病的遺傳分子機制,推動轉化醫學研究和成果轉化。
技術流程
載體構建- 目的基因過表達載體的構建。
病毒包裝- 表達載體、輔助質粒共轉染293FT細胞,收集病毒上清,純化和濃縮病毒顆粒。若選擇轉染,則跳過此步。
轉染、轉導- 電轉染或轉染試劑(脂質體等)進行細胞轉染,或病毒轉導。
篩選- 根據表達載體的篩選基因選擇藥物進行篩選,如嘌呤霉素、G418等。
擴大培養- 將篩選出的單克隆細胞進行擴大培養。
鑒定- PCR、Q-PCR、western等從DNA、mRNA、蛋白水平進行檢測。
| 服務步驟 | 服務周期 | 交付結果 |
| 目的基因合成 | 1周 | 測序報告 |
| 目的基因亞克隆 | 3天 | 凍干粉質粒、含重組質粒的甘油菌一管、測序報告 |
| 病毒包裝 | 1周 | 病毒儲存液(>10^8 PFU)、重組后的病毒載體質粒 |
| 陽性克隆篩選 | 2周 | 用于篩選的藥物濃度 |
| 陽性克隆鑒定 | 3天 | 陽性細胞株、測序報告、Q-PCR、western檢測結果 |
服務內容
我們的優勢
多樣的細胞種類- 在H1299、2F-2B、4T1、786-O、9607、THP-1、MCF7/ADR、A549、 V79、CHO、HepG2 等多個種屬細胞中成功構建過表達、Knockdown和Knockout細胞系。
各種表達載體- 通過2A、IRES、多啟動子、融合表達等手段,在一個質粒里實現同時表達兩個或者兩個以上基因。同時,還可以選擇多種啟動子、報告基因和親和標簽。
服務- 我們提供從穩定細胞系構建至重組蛋白生產的服務。
省時省錢- 在先進的實驗設備和完善的技術支持下,讓您在短時間內,用少量的錢獲得服務。





