CRISPR-Cas9是繼ZFN、TALENs等基因編輯技術(shù)推出后的第三代基因編輯技術(shù)，因其效率高、簡便、成本低，已成為當(dāng)今主流的基因編輯技術(shù)之一。工程化的CRISPR/Cas9 系統(tǒng)由兩部分組成：具有導(dǎo)向功能的single guide RNA (sgRNA)和行使DNA切割功能的Cas9 核酸內(nèi)切酶。當(dāng)細(xì)胞內(nèi)同時表達(dá) Cas9 蛋白和 sgRNA時，Cas9蛋白結(jié)合sgRNA靶向到目的DNA序列，誘導(dǎo)DNA雙鏈斷裂 (DSB)，引發(fā)細(xì)胞內(nèi)部的DNA修復(fù)機制：（1）如果有DNA修復(fù)模板進(jìn)入到細(xì)胞中，DSB依據(jù)修復(fù)模板，通過同源重組修復(fù)（HDR）途徑對斷裂DNA進(jìn)行修復(fù)，從而實現(xiàn)基因敲入、替換或點突變；（2）當(dāng)未提供 DNA 修復(fù)模板時，細(xì)胞會通過非同源末端連接方式（NHEJ）對斷裂DNA進(jìn)行修復(fù)，修復(fù)過程中通常會發(fā)生堿基插入或缺失的錯配現(xiàn)象造成移碼突變，從而實現(xiàn)基因敲除（Knock-out）。 除了傳統(tǒng)的SpCas9，SpCas9-HF1、SaCas9等其他版本的Cas9系統(tǒng)也已廣泛應(yīng)用于基因編輯。
安必奇有多年的穩(wěn)定細(xì)胞系構(gòu)建經(jīng)驗，可以根據(jù)您的科研需求將 Cas9核酸酶基因穩(wěn)定整合到您所指定的宿主細(xì)胞基因組。
應(yīng)用領(lǐng)域
sgRNA高通量篩選
基因編輯理想的細(xì)胞模型，包括基因敲除、基因敲入、基因誘變、基因標(biāo)記等
基因功能的研究
我們的優(yōu)勢
擁有成熟的穩(wěn)定細(xì)胞系構(gòu)建平臺和優(yōu)秀的技術(shù)團(tuán)隊
靈活的細(xì)胞系構(gòu)建策略：脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法、電穿孔法和病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)法
嚴(yán)格的質(zhì)量控制體系：細(xì)胞系無細(xì)菌、真菌和支原體污染
分離單克隆細(xì)胞，保證單一基因背景下持續(xù)、高水平的表達(dá)Cas9蛋白
Cas9 穩(wěn)定整合使sgRNA共轉(zhuǎn)染或共轉(zhuǎn)導(dǎo)更易操作
用T7 Endonuclease I對Cas9活性進(jìn)行功能驗證
豐富的宿主細(xì)胞類型：肝癌細(xì)胞、乳腺癌細(xì)胞、結(jié)腸癌細(xì)胞、肺癌細(xì)胞、胰腺癌細(xì)胞、胃癌細(xì)胞、胚胎腎細(xì)胞等
服務(wù)流程
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案例分析
案例1：HEK293T-SpCas9細(xì)胞系T7EI檢測結(jié)果
