在生物技術(shù)藥物領(lǐng)域，CHO細(xì)胞作為重組蛋白類(lèi)藥物的主要表達(dá)體系，因其結(jié)構(gòu)功能與人類(lèi)蛋白高度相似，被廣泛應(yīng)用于腫瘤及免疫疾病治療藥物開(kāi)發(fā)。其優(yōu)勢(shì)在于能夠高效表達(dá)外源蛋白，并且具有良好的遺傳穩(wěn)定性和生產(chǎn)性能。

當(dāng)前醫(yī)藥行業(yè)已經(jīng)形成共識(shí)：用于表達(dá)治療性蛋白的工程細(xì)胞需要來(lái)源于同一原始細(xì)胞，原因在于工程細(xì)胞的單克隆源性是產(chǎn)品的質(zhì)量、表達(dá)量穩(wěn)定性的必要條件，因此目前工程細(xì)胞的單克隆源性在藥品報(bào)批過(guò)程中被重視的程度越來(lái)越高，中國(guó)藥典關(guān)于重組蛋白產(chǎn)品要求做了如下表述“在細(xì)胞克隆過(guò)程中，應(yīng)選擇單個(gè)細(xì)胞用于擴(kuò)增”。國(guó)際人用藥品注冊(cè)技術(shù)協(xié)調(diào)會(huì)(ICH)Q5D也有表述，“對(duì)于重組產(chǎn)品而言，基質(zhì)指含有特定目的序列的轉(zhuǎn)染細(xì)胞，這些基質(zhì)應(yīng)該是由一個(gè)始祖細(xì)胞無(wú)性增殖而來(lái)”。2011/2012年美國(guó)食品及藥品管理局(FDA)也要求“提交數(shù)據(jù)進(jìn)行臨床研究申請(qǐng)(IND)需要確保這個(gè)方法基于一個(gè)單細(xì)胞克隆衍生而來(lái)”。

工程細(xì)胞的單克隆源性是保證產(chǎn)品質(zhì)量的重要因素之一，因此得到了越來(lái)越多的重視，藥物審評(píng)機(jī)構(gòu)要求報(bào)批單位采用合適的實(shí)驗(yàn)手段證明所用細(xì)胞的單克隆源性。常用的單克隆獲取方法包括有限稀釋法、ClonePix法、流式細(xì)胞熒光分選技術(shù)（FACS）等。然而，這些方法在操作效率、人工依賴(lài)性以及與生產(chǎn)狀態(tài)的接近程度上各有優(yōu)缺點(diǎn)。

NGS方法驗(yàn)證單克隆源性

北京安必奇生物科技有限公司的工程細(xì)胞單克隆源性NGS驗(yàn)證服務(wù)是一種強(qiáng)大的，高靈敏度檢測(cè)及驗(yàn)證單克隆源性的技術(shù)。這種檢測(cè)技術(shù)結(jié)合了特異性探針雜交捕獲，二代測(cè)序（NGS）技術(shù)和專(zhuān)家級(jí)生物信息學(xué)分析，提供更快的一站式檢測(cè)方案，囊括傳統(tǒng)檢測(cè)要求：

• 基因序列分析：目的基因（GOI）完整性及突變檢測(cè)

• 拷貝數(shù)測(cè)定：量化基因拷貝數(shù)

• 整合位點(diǎn)分析：明確外源基因在宿主基因組的整合位置

• 側(cè)翼區(qū)序列解析：驗(yàn)證整合位點(diǎn)周邊基因組穩(wěn)定性

• 插入/缺失檢測(cè)：識(shí)別序列結(jié)構(gòu)異常

圖1. 工程細(xì)胞單克隆源性驗(yàn)證服務(wù) (NGS方法)技術(shù)原理及流程簡(jiǎn)介

圖2. 抗體插入位點(diǎn)及單克隆源性鑒定的多種技術(shù)方案比較

   服務(wù)優(yōu)勢(shì)：

• 以一種技術(shù)取代Southern、一代測(cè)序、PCR和FISH多種技術(shù)

• 通過(guò)專(zhuān)家級(jí)生物信息學(xué)分析完成單克隆源性及遺傳穩(wěn)定性監(jiān)管要求

• 高檢測(cè)靈敏度

• 靈活檢測(cè)非完整整合的抗體序列

• 一次檢測(cè)三個(gè)重要數(shù)據(jù)（抗體整合位點(diǎn)，拷貝數(shù)和抗體突變）

• 免去引物偏好、設(shè)計(jì)時(shí)間和分析優(yōu)化

• 消除數(shù)據(jù)解讀中不必要的臆測(cè)

• 穩(wěn)定地提供快速可靠的結(jié)果

   服務(wù)流程

• 探針設(shè)計(jì)與合成：針對(duì)目標(biāo)序列定制高特異性探針文庫(kù)構(gòu)建

• 文庫(kù)構(gòu)建：優(yōu)化樣本處理與測(cè)序文庫(kù)制備

• 雜交捕獲：靶向富集目標(biāo)基因組區(qū)域

• 高通量測(cè)序：采用Illumina平臺(tái)進(jìn)行高深度測(cè)序

• 生物信息學(xué)分析：專(zhuān)家團(tuán)隊(duì)完成數(shù)據(jù)解讀與可視化

• 項(xiàng)目報(bào)告：提供符合申報(bào)要求的標(biāo)準(zhǔn)化報(bào)告

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